Microbiologie (pré-option)
A B C D E F H P Q R S T U
A
- Altération :
à cause de levures, de moisissures ou de bactéries elle
n'est pas toujours pathogène, elle entraîne un changement
d'aspect, d'odeur, ou d'arôme.
- Analyse
:
- Toute analyse commence par un état frai et un gram pour donner une idée de la charge bactérienne.
- Recherche d'une flore par catégorie de germe.
- ASR 46 : Anaérobie (stricte) Sulfito-Réducteur à 46°C (température d'incubation).
- Baird
Parker : Les Staph. aureus dégradent la tellurite en tellure
(colonies noires), possèdent la
lipoprotéinase (cercle claire au boût de 24h) et la lécithinase
(auréole opaque au boût de 48h).
Faire fondre le milieu.
Rajouter en surfusion le jaune d'œuf et la sulfaméthazine.
Ensemencer en surface par 0,1 ml à la pipette au milieu puis étaler.
...
- Broyage
: on prélève stérilement 25 g
d'échantillon. On les place dans un sachet avec 225 ml d'eau
peptonée (ou d'eau distillée pour plus
d'économie). Puis on broie :
- par pression : ce qui donne déjà un échantillon dilué à 10-1.
- par mixeur rotatif : (à éviter cependant à cause du fort brassage d'air qui risque de détruire les germes à respiration anaérobie stricte)ce qui donne déjà un échantillon dilué à 10 -1.
- Clœstridium perfingens
: pour le rechercher, placer les milieu en jarre anaérobie,
faire le test catalase (+ bacillus ; - clœstridium) et d'autres
bouillons ou travailler en tube (TSC* ou
gélose VFSR (Viande Foie Sulfito Réducteur) avec join de
dilatation). Ils sont contenus souvent dans les plats à
réchauffer.
- Coliformes
: ENTEROBACTERIACEAE qui sont lactose
+ à 30°C.
- Coliformes fécaux (1): 99% E. coli indole +, + Hajna K.
- Coliformes thermorésistants (2): lactose + à 44°C
On compte uniquement les colonies comprises entre : 15<colonies<150température d'incubation durée milieu 30°C (1)
44°C (2)24 h milieu désoxycholate* - Contamination :
Il existe 3 types de contamination : préexistante (sur la matière première) ; apportée accidentellement au niveau des process ; ajoût volontaire (ferments lactiques = agents de technologie).
- Dénombrement =
comptage, numération, étude quantitative. Nombre de colonies x
1/dilution UFC/ml.
Autres techniques : néphélémétrie (densité de bouillon), poductions (ac. lactique…), consommation de substrat (dosages), impédancémétrie (résistance offerte au passage de membranes), production de chaleur, mesure du poids sec, dosage des protéines.
- ensemenceur spiral*
- unité de flitration*
- matériel pour les prélèvement de contact :
- boîte rodac*
- lame de contact (même principe que les boîtes rodac)
- écouvillon
- pétri film (remplace les boîtes gélosées) un ml par dilution
- pour l'analyse de l'air :
- gélose ouverte (léger aperçu)
- biocollecteur d'air
aspire de l'aire et propulse les bactérie sur une gélose, détermine l'empoussièrement des salles. - technique du dosage de l'ATP
- compteur de particules : compteur qui enregistre le nombre de colonies, leur diamètre …
- chemunex on mélange l'échantillon avec avec du fluorochrome, au rayon laser les bactéries apparaissent alors fluorescentes.
- Désinfection
: opération permettant momentanément de tuer ou
d'éliminer les micro-organismes (inactiver les virus) sur les
milieux inertes. Elle est d'autant plus efficace et facilité si
elle a été précédée de l'utilisation
d'un détergeant. (physique ou chimique)
- Désoxycholate
lactose : ensemmencer en fond de boîte par 1ml ...
Lecture :
indicateur de réaction sucre + - inhibiteurs rouge neutre lactose Rouge Incolore citrate et désoxycholate
- Dilutions
:
- Échantillons : 2 types =
2 préparations
- Ensemenceur spiral : évite les erreurs dues au facteur humain, elle est très précise, très rapide, et peu réaliser beaucoup d'ensemencement, mais elle coûte chère : 80 000 €. Elle pompe stérilement un très petit volume d'échantillon, puis dépose précisément en spirale, sur une gélose, le prélevement. Après incubation, la machine lit le résultat (numération).
- Flores :
- émergeantes = flores que l'on rencontre de plus en plus
souvent depuis 20 ans.
- Entérobactérie yersina enterocolitica : souvent associée à tort aux caochons, responsables de nombreuses "fausses" apendicites. On utilise la gélose Schiemann coulée en boîte avec les antibiotiques, ensemencée en surface (0,1 ml de dilution), incubée à 30 °C pendant 24 h et on lit et compte les petites colonies roses à centre rouge puis gram ox type fermentaire API ... Ce milieu est électif.
- Bacillus céreus : TIAC milieu mossel : mannitol - ; lécithinase + incuber 24 à 48 h à 30°C.
- Lystéria monocytogène
: pré-enrichissement, enrichissement, isolement ; bouillon de
Fraser, ACOA, Oxford (petites colonies brunes, auréoles noires),
EF GRAM
20% mortalité !! - Campilo bacter jejununi : (bacille) souvent associé aux volailles mais c'est à tord. Pour les enfants de 3-4 ans perforations digestives avec hémoragies. Milieu Karmali (en surface) type respiratoire micro-aérophile, colonies petites, satinées, formant une nappe. EF GRAM
- Streptocoque D : germes fécaux résistant
à l'extérieur de l'organisme, témoins d'une
contamination fécale ancienne, traceur de validation de process.
- émergeantes = flores que l'on rencontre de plus en plus
souvent depuis 20 ans.
- FMAT
: (Flore Mésophile Aérobie Totale (qui est plutôt aérobie non totale))
température d'incubation durée milieu 30 °C 72 h PCA (Plate Count Agar)*
- Hygiène : "en dehors de toute souillure chimique, de toute souillure matérielle, on peut définir l'hygiène alimentaire comme étant une lutte permanante antimicrobienne à toutes les étapes de l'élaboration du produit : matière première, transformation, transport, conservation, distribution."
- PCA (Plate
Count Agar)
: ensemmencer au fond d'une boîte par dilution avec 1 ml
(à la pipette) (6 boîtes). Puis couler une gélose
PCA en surfusion par
dessus, homogénéiser doucement, et incuber en retournant la boîte.
Après incubation, on compte les colonies (forme lentilleculaire dedans et cercle en surface) (facteur 10 entre chaque dilutions). On ne compte qu'entre 30<colonies<300, sinon les valeurs ne sont pas significatives (NS).
- PCR : test détectant les listéria dans le lait.
- Qualité = vie de l'entreprise
- Risque alimentaire :
"concept statistique lié au danger et fonction de la
probabilité d'un efet néfaste et de l'importance d'un tel
effet résultant de la présence d'un objet dans un
aliments."
- Boîte
rodac :
Idéal pour vérifier l'efficacité d'un nettoyage. S'il y a plus de 45 - 50 colonies l'endroit et dit souillé. Il faut que ce soit toujous le même utilisateur.
- Salmonella
: Une matrice est corrompue s'il y a au moins une salmonelle. On ne
fait donc pas de quantitatif mais du qualitatif. La détection
est facilitée s'il y a multiplication. Après la dilution
ou le broyage on procède donc à :
- un pré-enrichissement : on laisse à incuber 16h à 37°C.
- un enrichissement =
sélection sur deux bouillons sélèctifs
(tellurite…) et sur une gélose spécifique
(Hektoen, Ramback,…) ; incuber 24 h à 37 °C. Sur
Hektoen les colonies suspectes apparaîtrons bleues vertes, avec
un centre noir (H2S).
- puis réaliser des tests
complémentaires : uréase rapide, galerie API20E, technique
immuno-enzymatique (test ELISA*) ou envoyer
la souche à l'instiut Pasteur.
- Test de rapidité (SRT*)
- Salmonella 1,2 test : très efficace
- Spores
bactériennes : (Clœstridium et Bacillus) Placer une portion
d'échantillon à 80°C pendant 1/4 d'heure (spore choc). Si l'on retrouve des
bactérie -> sporulation.
- SRT : un test coûte 10 €, tubes avec 4 milieux désydraté, on compare le résultat avec des témoins, attention lors de la préparation, il ne faut pas de bulles. Le résultat n'est pas fiable à 100 % il est nécéssaire de le vérifier avec d'autres tests.
- Staphylococcus
aureus : + protéine A + coagulase liée + recherche des
entérotoxines (test immunoenzymatiques)
température d'incubation durée milieu 37°C 24 - 48 h Baird Parker*
- test
ELISA :
Plus la solution est bleue moins il y a de Salmonella, Listéria …. Ce test est rapide (5h) mais lorsqu'il s'avère positif on vérifie quand même.
-
TIAC : Toxi-Infection Alimentaire Collective touche au moins deux personnes proches, avec les même symptômes, elles ont un coût élevé (hospitalisation, décés, …)
- TSC : Triptose
Sulfite Cyclocérine
- regénérer pendant 15 à 20 min (pour chasser l'oxygène du milieu)
- en surfusion ajouter la cyclocérine (antibiotique) à la suraface.
- Ne pas trop secuer : mélanger en effectuant des mouvements circulaires.
- Ajouter 5 ml d'échantillon
- refroidir dans de l'eau froide
- incuber à 46 °C (24 à 48 h)
- Lire : grosses colonies noires irrisées.
- EF + GRAM
- Unité de flitration : techinque d'analyse des liquide et en particulier de l'eau. On récupère les bactéries sur un filtre (en acétate de cellulose de faible diamètre : 47 mm ; dont la porosité varie de 0,2µm (long mais il récupère tout voire même autre chose que les micro-organismes), à 0,45 µm (filtre idéal : assez rapide, et récupère tous (ou presque) des micro-organismes), ou à 0,8 µm ( très rapide, mais peu laisser passer des micro-organismes). L'appareil se constitu de trois partie : une contenant le volume à filtrer, le porte filtre et la "poubelle". On manipule sous un cône de stérilité, une fois la manipulation finie, on place le filtre dans une petite boîte de pétri, on incube et analyse.
